Trypsinization ni mchakato wa kutengana kwa seli kwa kutumia trypsin, kimeng'enya cha proteolytic ambacho huvunja protini, ili kutenganisha seli zinazoshikamana na chombo ambamo zinakuzwa. Inapoongezwa kwenye utamaduni wa seli, trypsin huvunja protini zinazowezesha seli kushikamana na chombo.
Kwa nini tunajaribu kusawazisha seli?
Ujaribio mara nyingi hufanywa ili kuruhusu kupita kwa seli hadi kwenye chombo kipya, uchunguzi kwa ajili ya majaribio, au kupunguza kiwango cha muunganiko kwenye chupa kwa kuondolewa kwa asilimia ya seli.
Je trypsin hufanya kazi vipi ili kutenganisha seli?
Trypsin/EDTA ni mbinu iliyounganishwa ya kutenganisha seli. Trypsin hupunguza protini za mshikamano katika mwingiliano wa seli-seli na seli-matriki kwa kukata asidi ya amino ya protini za mshikamano hasa kwenye lysine au aginine kwenye C-terminal ikiwa asidi ya amino ya juu haina proline.
Je, unapataje seli za kuambatana zilizojaribiwa?
Utaratibu
- Ondoa chombo cha kati kutoka kwa chombo cha utamaduni kwa kutamani na osha tabaka moja kwa myeyusho wa chumvi usio na Ca2+ na Mg 2+ ili kuondoa athari zote za seramu. …
- Toa trypsin au trypsin/myeyusho wa EDTA wa kutosha kwenye vyombo vya kitamaduni ili kufunika kabisa safu moja ya seli na weka kwenye incubator ya 37 °C kwa ~ dakika 2.
Je, ninawezaje kuzima trypsin katika utamaduni wa seli?
Visanduku vinapoonekana kutengwa ongeza juzuu 2ya media ya ukuaji kamili iliyopashwa moto ili kuwasha trypsin. Tawanya kwa upole kati kwa kusambaza bomba juu ya uso wa safu ya seli mara kadhaa ili kuhakikisha kupona kwa >95% ya seli. Kwa tamaduni zisizo na seramu, kizuizi cha trypsin ya soya (Bidhaa No.
