Kadiri uzito wa molekuli unavyozidi kuwa mkubwa, ndivyo koili inavyozidi kwenda na polepole ndivyo molekuli inavyosonga. Kwa hivyo, electrophoresis + SDS hutengana kwa msingi wa uzito wa molekuli, si kwa msingi wa malipo asilia. Kumbuka muhimu: Kwa kawaida protini za urefu sawa haziwezi kutenganishwa kwa kutumia gel electrophoresis + SDS.
Je, unatenganisha vipi protini za uzito sawa wa molekuli?
Centrifugation, electrophoresis, na chromatography ndizo mbinu za kawaida za kusafisha na kuchanganua protini. Centrifugation hutenganisha protini kulingana na kiwango chao cha mchanga, ambacho huathiriwa na wingi na umbo lao.
Ni mbinu gani hutenganisha protini kwa msingi wa malipo?
Protini zinaweza kutengwa kwa misingi ya malipo yake halisi kwa chromatography ya kubadilishana ion. Ikiwa protini ina chaji chanya chanya katika pH 7, kwa kawaida itafunga kwenye safu wima ya shanga zilizo na vikundi vya kaboksili, ilhali protini iliyo na chaji hasi haitakuwa (Mchoro 4.4).
Ni mbinu gani kati ya zifuatazo zinazofaa zaidi kutenganisha protini kulingana na uzito wa molekuli?
Mbinu za Kromatografia kulingana na utenganishaji ni bora sana katika utenganishaji, na utambuzi wa molekuli ndogo kama asidi ya amino, wanga na asidi ya mafuta. Hata hivyo, chromatography za mshikamano (yaani kromatografia ya kubadilishana ion) zinafaa zaidi katika utenganisho wa molekuli kuu kama asidi nucleiki, na protini.
Safu ya aina ganikromatografia hutenganisha protini kwa msingi wa uzito wa molekuli?
Uchujaji wa gel (GF) chromatography hutenganisha protini kwa misingi ya ukubwa wa molekuli. Utenganisho hupatikana kwa kutumia matriki ya vinyweleo ambapo molekuli, kwa sababu za kidunia, zina viwango tofauti vya ufikiaji--yaani, molekuli ndogo zina ufikiaji mkubwa na molekuli kubwa zaidi hazijumuishwa kwenye tumbo.
