Visanduku vinapoonekana vimetenganishwa ongeza juzuu 2 za midia kamili ya ukuaji iliyopashwa moto ili kuwasha trypsin. Tawanya kati kwa upole kwa kusambaza bomba juu ya uso wa safu ya seli mara kadhaa ili kuhakikisha urejeshi wa >95% ya seli.
Je, ninawezaje kuacha shughuli ya trypsin?
Umeng'enyaji wa trypsin unaweza kusimamishwa kwa kugandisha au kwa kupunguza pH ya mmenyuko chini ya pH 4 kwa kuongeza formic, asetiki, au trifluoroacetic acid (trypsin itapata shughuli tena wakati pH imeinuliwa juu ya pH 4). Sampuli zilizosagwa zinaweza kuhifadhiwa kwa -20°C.
Ni nini kinapunguza trypsin?
Bafa iliyo na ioni za kalsiamu na magnesiamu pia itapunguza kasi ya shughuli ya trypsin. FBS hata hivyo ndiyo njia mwafaka zaidi ya kuzuia shughuli ya trypsin.
Je, seramu huwasha trypsin?
Seramu huzima trypsin iliyobaki kutoka kwa usagaji wa enzymatic wa figo na vimeng'enya vya proteolytic vilivyosanifiwa na seli. Seli mpya zilizo na trypsinized zinaweza kukuzwa na kuwa tabaka moja kwa kukosekana kwa seramu mradi zilioshwa mara kwa mara ili kuondoa mabaki ya trypsin.
Je, inachukua media ngapi kuzima trypsin?
Mradi tu unatumia angalau uwiano wa 1:1 wa 5-10% serum-iliyo na trypsin yako inapaswa kuwa na kizuizi cha kutosha, ikifuatiwa na centrifugation. na kubadilishana wastani na kati safi.
